PGC1基因Thr394Thr多态性与Ⅱ型糖尿病关系的研究 - 中华医师网—医师期刊网—医学期刊通讯社—职业医师网—执业医师网—乡村医师网—中国医师网—名医师网—医师期刊阅读网—医师期刊数字网—海纳各界名医—呵护大众健康!

作者：张子波
作者单位：延边大学基础医学院　细胞生物学与医学遗传学教研室，吉

林延吉 133000
《延边大学医学学报》2007年12月30卷4期实验研究
【摘要】探讨延边地区朝鲜族及汉族人群PGC1

基因Thr394Thr多态性与Ⅱ型糖尿病的相关性.［方法］采用聚合酶链反

应单链构象多态性（PCRSSCP）方法对104例糖耐量正常者和113例

Ⅱ型糖尿病患者的PGC1基因Thr394Thr多态性基因型进行对照研究.［

结果］朝鲜族和汉族正常人PGC1基因Thr394Thr多态性的A等位基因频

率分别为23.3%，20.7%；糖耐量正常组及Ⅱ型糖尿病组人群的PGC1基

因Thr394Thr多态性的A等位基因频率均为22.1%.［结论］延边地区朝鲜

族和汉族人群PGC1基因Thr394Thr多态性间无显著性差异；PGC1基

因Thr394Thr多态性与Ⅱ型糖尿病发病无相关性.

【关键词】多态性单核苷酸糖尿病 Ⅱ型人种群

Study on relationship of PGC1 gene Thr394Thr

polymorphism and type 2 diabetes mellitus

ZHANG Zibo1,　L Fuqing2,　WANG Weijie3,　LI Bo1，

　YANG Kangjuan1,　JIN Yuanzhe4

(1.Department of Cell Biology and Medical Genetics,

Yanbian University College of Basic Medicine, Yanji 133000；

2.Department of Internal Medicine, Dunhua City Hospital,

Dunhua 133700；3.Department of Hormonology，　Hunchun City

Hospital,　Hunchun 133300；4.Department of Physiology and

Pathophysiology, Yanbian University College of Basic Medicine,

Yanji 133000：Jilin, China)

ABSTRACT:OBJECTIVETo determine the correlation of

peroxisome proliferators activated receptorγ coactivator 1

(PGC1) gene Thr394Thr polymorphism and type 2 diabetes

mellitus (T2DM) for KoreanChinese and Han nationality in

Yanbian area.METHODSPGC1 gene Thr394Thr polymorphism in 104

cases of normal glucose tolerant (NGT) and 113 cases of T2DM

was detected by PCRSSCP.RESULTSThe A allele frequencies of

NGT in KoreanChinese and Han nationality were 23.3% and

20.7%, respectively, and there was no significant difference

between two groups. The A allele frequencies of NGT and T2DM

subjects were all of 22.1%.CONCLUSIONThere was no difference

in frequency distribution of PGC1 gene Thr394Thr

polymorphism between KoreanChinese and Han nationality in

Yanbian area, and the PGC1 gene Thr394Thr polymorphism was

not associated with T2DM.

Key words:polymorphism, single nucleotide；diabates

mellitus, type2；ethnic groups

过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子1（peroxisme proliferator

activated receptouγ， PGC1）是新颖的核受体家族的转录共

激活蛋白,是过氧化物酶体增殖物受体γ（PPARγ）的转录辅激活因

子［1］.该基因定位于人类染色体4p15.1，全长为6kbp，由13个外显子

和12个内含子组成［2］.PGC1对体内能量代谢有调控作用，提示它可

能与肥胖、Ⅱ型糖尿病及脂代谢密切相关.本研究应用聚合酶链反应

单链构象多态性（PCRSSCP）技术探讨了延边地区朝鲜族及汉族人群

PGC1基因Thr394Thr多态性与Ⅱ型糖尿病的关系.

1 对象与方法

1.1 对象在吉林省延边地区，遵循自愿知情的原则随机选择217

名被调查者，对象间均无血缘关系，且双亲连续三代均为同一民族.Ⅱ

型糖尿病的诊断参照1999年世界卫生组织（WHO）制定的Ⅱ型糖尿病诊

断标准进行.研究对象中糖耐量正常者为104名，列入糖耐量正常组

(NGT)，其中朝鲜族为46人，男女比例为100∶96，年龄为31～63岁，汉

族为58人，男女比例为100∶106，年龄为32～60岁；Ⅱ型糖尿病者为

113名，列入为Ⅱ型糖尿病组(T2DM)，其中朝鲜族为48人，男女比例为

100∶104，年龄为45～66岁，汉族为65人，男女比例为100∶109，年龄

为46～67岁.

1.2 方法

1.2.1 人类基因组DNA的提取及鉴定取酸性枸橼酸葡萄糖（ACD

）抗凝全血3mL，置于-80℃冰箱冻存.基因组DNA的提取严格按照小量全

血DNA提取试剂盒（由北京华美生物工程公司提供）说明书步骤进行操

作，4℃条件下保存.利用DNA/RNA蛋白测定仪测定DNA纯度.结果示所有

被检样品质量浓度均在200mg/L以上；OD260nm/OD280nm比值大于1.6，

提示DNA纯度良好.

1.2.2 PCR扩增 PCR反应总体积为25μL，引物序列为，上游引物

5′TGGTGGACACGAGGAAAG3′，下游引物5′

CTGCCAATCAGAGGAGACAT3′；扩增片段大小为166bp，模板DNA为100ng

，dNTP为200μmol/L，上游引物及下游引物质量浓度均为12.5pmol/L，

TaqDNA聚合酶为1U，扩增循环参数为95℃变性45s，56℃退火45s，72℃

延伸45s，共30个循环，循环前反应液95℃预变性3min，最后72℃延伸

10min.反应在PCPersonal Cycler (Biometra) PCR扩增仪上进行，所

用试剂均为北京华美生物工程有限公司产品.

1.2.3 SSCP检测取PCR扩增产物8μL，加入2μL变性剂（950g/L

甲酰胺，10mmol/L EDTA，0.2g/L溴酚蓝），98℃加热变性10min，取出

后立即放入冰浴中2min以上.在4℃条件下，将全部水相上样于12g/L非

变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）上，在300V条件下电泳8h，取出凝胶行银

染，观察显示条带情况.

1.2.4 DNA序列测定选取SSCP结果具有代表性的PCR产物3份进行

DNA序列测定，以确保SSCP结果判读的正确性.

1.2.5 统计学处理运用基因计数法计算基因型频率和等位基因

频率，利用HardyWeinberg遗传平衡定律检验研究样本的群体代表性.

所有统计运算均在SPSS11.1统计软件中进行，两组间基因型及等位基因

频率比较采用χ2检验进行.

2 结果

2.1 PCR扩增琼脂糖凝胶电泳检测结果示，目的片断长度为

166bp，与理论设计相符（图1）.

图1 琼脂糖凝胶电泳PCR扩增产物显示图2.2 SSCP检测 SSCP电

泳检测结果结合序列报告分析显示，所检测的基因型组配形式如下：位

置偏下的2条带示纯合野生型GG；位置偏上的2条带示纯合突变型AA；3

条异常带